由于高效液相色譜儀(HPLC)具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域。因?yàn)楦咝б合嗌V儀都是一些很精密的儀器,有些溶劑和樣品在進(jìn)樣之前,可能里面有些雜質(zhì)或者不溶的東西,如果不用微孔濾膜過(guò)濾的話(huà),這些東西進(jìn)去可能會(huì)對(duì)儀器造成傷害,會(huì)出現(xiàn)堵塞柱子之類(lèi)的問(wèn)題。對(duì)流動(dòng)相過(guò)濾必不可少。
流動(dòng)相溶劑和樣品過(guò)濾非常重要,它會(huì)對(duì)色譜柱、儀器起到保護(hù)作用,消除由于污染對(duì)分析結(jié)果的影響。常用液相色譜儀流動(dòng)相和樣品溶液過(guò)濾方法有兩種,分別是溶劑過(guò)濾器和過(guò)濾頭。
溶劑過(guò)濾器的原理和方法是利用濾膜過(guò)濾流動(dòng)相溶液中的雜質(zhì),使用真空泵加快過(guò)濾的速率。其中,起關(guān)鍵性作用的就是濾膜,濾膜分為有機(jī)和水系這兩種,濾膜種類(lèi)的選擇根 據(jù)過(guò)濾流動(dòng)相溶液的性質(zhì)而不同。 水系濾膜適用于水基溶液,不耐有機(jī)溶劑,具有較高的化學(xué)和熱穩(wěn)定性,流速快、耐酸堿能力強(qiáng),具有高機(jī)械強(qiáng)度,對(duì)蛋白質(zhì)吸 附力較低。有機(jī)濾膜為疏水性濾膜,適用于有機(jī)溶劑及空氣過(guò)濾。耐酸耐堿,抗氧化劑。耐高溫,強(qiáng)度好,化學(xué)性能穩(wěn)定。不僅適用于含有酸堿性的水溶液,更適用 于含有有機(jī)溶劑,如醇類(lèi)、烴類(lèi)、脂類(lèi)、酚類(lèi)、酮類(lèi)等有機(jī)溶劑。
溶劑過(guò)濾器長(zhǎng)期用于過(guò)濾溶劑中的雜質(zhì),溶劑的質(zhì)量或污染以及藻類(lèi)的生長(zhǎng)會(huì)堵塞溶劑過(guò)濾器,從而影響泵的運(yùn)行,尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液。為有效防止溶劑瓶 內(nèi)溶劑過(guò)濾器的堵塞,在使用過(guò)程中須嚴(yán)格執(zhí)行溶劑過(guò)濾,避免使溶劑瓶暴露在直射陽(yáng)光下,盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液,存放多日的蒸餾 水及磷酸鹽緩沖液不宜使用。
過(guò)濾頭用于液相色譜儀樣品進(jìn)樣系統(tǒng),一般與注射器結(jié)合使用,使用方法是在注射器攝入適量樣品溶液之后,將過(guò)濾頭安裝在注射器進(jìn)口處,在注射器向儀器進(jìn)樣口中注射樣品溶液時(shí)即可起到過(guò)濾的作用。
過(guò)濾頭堵塞會(huì)影響過(guò)濾速率和效果,測(cè)試過(guò)濾頭是否堵塞,可以將過(guò)濾頭從瓶蓋組件處拔下,使管線(xiàn)中充滿(mǎn)溶劑,如果過(guò)濾頭沒(méi)有堵塞,溶劑會(huì)自由滴出;如果過(guò)濾頭已經(jīng)堵塞,則沒(méi)有溶劑或只有很少的溶劑滴出。過(guò)濾頭堵塞后的處理方法是 將過(guò)濾頭從組件中取下,在濃硝酸(35%)中浸泡1h,然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。不銹鋼材料的過(guò)濾頭是可以超聲清洗,玻璃材料的過(guò)濾頭發(fā)生堵 塞,不推薦超聲清洗,因?yàn)槌暫苋菀灼茐牟Aн^(guò)濾頭的過(guò)濾板,只推薦用稀硝酸(35%左右)浸泡,浸泡大約一個(gè)小時(shí)后,再用水洗凈過(guò)濾頭。
氣泡的產(chǎn)生會(huì)使液相色譜儀峰面積重復(fù)性不好,靈敏度下降,壓力升高等,避免吸入空氣,流動(dòng)相要充分脫氣,提高實(shí)驗(yàn)精度。