近年來,在HPLC基礎(chǔ)上發(fā)展出了新型色譜技術(shù),包括低壓液相色譜(LPLC)、中壓液相色譜(MPLC)以及快速蛋白液相色譜(FPLC),在這些新型色譜技術(shù)當(dāng)中,快速蛋白液相色譜(FPLC)可以非常迅速地分離復(fù)雜混合物,能夠在短時間內(nèi)對大量樣品加以純化。其特性表現(xiàn)為較大的容量、較高的回收效率以及不易失活的生物大分子等。能夠越來越廣泛地使用于生命科學(xué)研究及藥物生產(chǎn)上。
FPLC全稱為快速蛋白液相色譜(Fast protein liquid chromatography),其原理與高效液相色譜理論類似,是由經(jīng)典的液體柱層析引入氣相色譜理論,并且對相體進(jìn)行了改革,配用高壓輸液泵,采用高靈敏檢測器、梯度洗脫裝置、自動收集裝置和微機(jī)等發(fā)展起來的現(xiàn)代液相色譜。
HPLC與FPLC的異同
FPLC與HPLC的相同點:
輸液泵、高靈敏檢測器、梯度洗脫裝置、自動收集裝置和計算機(jī)控制等設(shè)備均為FPLC與HPLC所采用,快速、分辨率高、分離效能高等特點FPLC與HPLC也均具備。
FPLC與HPLC的不同點:
由耐高壓的塑料管組成FPLC的管道系統(tǒng),由柱塞式泵驅(qū)動流動相,中低壓,使用內(nèi)徑較大的色譜柱,分析精度較高,0~100 mL/min(zui大流速可達(dá)1 000 mL/min)為流速范圍,分析精度低于HPLC,僅使用常規(guī)無機(jī)鹽溶液,對于大規(guī)模純化樣品非常適用。
HPLC的管道系統(tǒng)所采用的材料大都為金屬,往復(fù)泵或隔膜泵一起驅(qū)動流動相,高壓,使用內(nèi)徑較小的色譜柱,有較高的分析精度,流速蕞大一般不高于20 mL/min(有些制備級HPLC能夠達(dá)到300 mL/min),有時一定濃度的有機(jī)溶劑需要被使用,對于微量樣本檢測或少量純化制備君適用。
采用HPLC來對生物大分子分離純化時,因為液相載體通常是有機(jī)溶劑,容易變性失活生物大分子,使得生物大分子的回收率降低。同時,采用非惰性的不銹鋼來對HPLC系統(tǒng)的流通線路進(jìn)行制造,金屬離子工作狀態(tài)下可能會發(fā)生解離,從而對某些蛋白質(zhì)組分吸附。
FPLC的層析柱為耐高壓的有機(jī)玻璃管,用耐高壓的非金屬材料制成其它管道,同時采用惰性液相載體,能夠使蛋白組分安全快速地分離。所以FPLC對HPLC的操作簡易、重復(fù)性強(qiáng)、分離速度快等特點加以保留,并且在生物大分子分離純化過程中分辨率和實用性更加的高。FPLC有其專用預(yù)裝柱,分子篩、離子交換、疏水層析等各類層析柱也配備了,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、化學(xué)和環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域。