在液相色譜分析中，我們經(jīng)常會遇到兩個化合物無法得到基線分離或分離度差。液相色譜中流動相條件，色譜柱選擇以及系統(tǒng)硬件的設(shè)置都會影響分離度。我們可以從以下幾個方面考慮：
1.流動相
a. 流動相中有機溶劑的類型和比例，會影響色譜分離的選擇性。對于反相色譜模式，常用的有機溶劑有甲醇、乙腈和四氫呋喃。我們可以通過改變流動相中的有機相種類或調(diào)整其比例，來改變選擇性和分離度。
b.流動相的pH值和緩沖鹽的添加也會影響分離度。對于中性的化合物，無論是極性還是非極性的，流動相pH值的改變不會對其選擇性有太大的影響；對于可解離的化合物，pH的改變會產(chǎn)生較大的影響。對于酸性化合物，比如苯甲酸，其pKa為4.2，當流動相pH值大于5.7（pKa+1.5），則苯甲酸以離子型態(tài)存在，則與反相固定相之間的作用較弱，保留時間較短，當流動相pH值小于2.7 （pKa−1.5），則苯甲酸以分子形態(tài)存在，則與反相固定相之間有更強的保留作用，保留時間更長。同樣，對于堿性化合物，當流動相的pH≥（pKa+1.5），則化合物以分子形態(tài)存在，對于反相色譜柱保留較強，當流動相的pH≤（pKa−1.5），則化合物以離子形態(tài)存在，對于反相色譜柱保留較弱。我們也可以通過添加緩沖鹽來調(diào)整流動相的離子強度，來改善目標化合物與固定相之間的保留。
2.固定相
固定相中鍵合相的類型，填料的孔徑，封端類型以及色譜柱的粒徑和尺寸都會影響色譜分離的結(jié)果。其中最主要的因素是鍵合相的選擇。如果色譜分離結(jié)果差，除了優(yōu)化流動相之外，我們可以考慮改變鍵合相。比如，當你采用C18固定相無法得到好的分離結(jié)果，可以考慮極性較強的C8固定相，或者選擇性與其有較大差異的Bonus RP或苯基己基柱進行嘗試?；蛘卟捎梅舛说纳V柱代替未封端的色譜柱，對于堿性化合物的分離會得到更優(yōu)異的峰型，從而改善色譜分離的結(jié)果。另外減小色譜柱粒徑或適當增加色譜柱的長度，也可以提高柱效，改善分離結(jié)果，比如可以采用小粒徑1.8um填料ZORBAX RRHT或RRHD色譜柱，或者表面多空層薄殼型填料poroshell120色譜柱，通過提高柱效來改善分離度。
3.硬件系統(tǒng)
對硬件系統(tǒng)的一些參數(shù)進行調(diào)整，也可以在一定程度上改善色譜分離的結(jié)果。比如：采用較高的采樣速率來減小色譜峰的峰寬而提高分離度；采用較小內(nèi)徑的管線和較小的流通池來減小擴散體積和延遲體積減小色譜峰的展寬；或者通過提高色譜柱的柱溫來改善分離度。
譜析公司集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售和服務(wù)為一體，致力為客戶提供色譜分離分析技術(shù)、產(chǎn)品和整體解決方案。色譜技術(shù)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、食品安全檢測、環(huán)境監(jiān)測、精細化工等關(guān)系民生并處于快速發(fā)展的行業(yè)。
